Основная историческая экспозиция «История Донского казачества XVI-нач. XX в» представлена во дворце (жилом доме) атамана Данилы Ефремова (1690-1760 гг.). Здание расположено на территории, единственной в Ростовской области, казачьей атаманской усадьбе – подворье атаманов Ефремовых (сер. XVIIIв), которое является объектом культурного наследия федерального значения. Экспозиция занимает 12 залов, общей площадью 520 кв. м.

На экспозиции посетители познакомятся с историей Донского края, начиная с XVI и заканчивая началом ХХ века. Узнают о возникновении донского казачества; о значимых событиях: восстаниях Разина, Булавина, Пугачева, участии донских казаков в войне 1812 года, разжаловании г. Черкасска в станицу Старочеркасскую и переноса столицы донских казаков в г. Новый Черкасск; познакомятся с бытом, обычаями и культурой жителей Дона; узнают о знаменитом донском казаке – вихрь-атамане Матвее Платове.